YY/T 1699-2020 組織工(gōng)程醫療(liáo)器械產品(pǐn) 殼聚(jù)糖(táng)

範圍
本標準規定了用(yòng)於製備組織工(gōng)程(chéng)醫(yī)療(liáo)器械(xiè)產品(pǐn)的殼聚糖(táng)及其鹽的要求，試驗方(fāng)法等
。
本(běn)標(biāo)準(zhǔn)適用於(yú)製備組織工程醫療器械產品的殼聚(jù)糖(táng)及(jí)其(qí)鹽(yán)
。

術(shù)語(yǔ)和定義(yì)
下列術語和定義適用於本(běn)文件
。
殼聚糖(táng)  chitosan
由2-氨(ān)基-2-脫氧-D-吡喃葡萄(táo)糖(GlcN)和2-乙(yǐ)酰(xiān)氨基(jī)-2-脫氧-D-吡喃(nán)葡(pú)萄糖(táng)(GlcNAc)通過β(1→4)連接(jiē)而成的綫(xiàn)性多糖(táng)
。其結(jié)構式(shì)為:


脫(tuō)乙酰度  degreeofdeacetylation
一(yī)個殼(ké)聚糖(táng)分(fēn)子中(zhōng)葡萄(táo)糖(táng)胺單(dān)元(yuán)(脫乙(yǐ)酰基的單(dān)元)的摩(mó)爾分(fēn)數
。

分類(lèi)
按(àn)照是否(fǒu)與酸結合(hé)，可(kě)分為殼聚糖，殼(ké)聚(jù)糖鹽酸(suān)鹽(yán)，殼(ké)聚(jù)糖(táng)乙酸鹽，殼(ké)聚(jù)糖穀(gǔ)氨酸鹽和殼(ké)聚糖乳(rǔ)酸鹽
。

動物(wù)源性(xìng)材料要求
動(dòng)物(wù)組織(zhī)中提取(qǔ)製備的(dí)殼聚(jù)糖及其(qí)鹽(yán)應(yīng)按照(zhào) YY/T 0771.1，YY/T 0771.2，YY/T 0771.3 的要求進行管(guǎn)理和(hé)控(kòng)製
。

要求(qiú)
性狀
類白色或(huò)淡黃(huáng)色粉末(mò)狀，絲狀或片(piàn)狀(zhuàng)的固(gù)體(tǐ)，無(wú)臭(chòu)
。
傅裏葉(yè)變換紅外(wài)光譜(pǔ)(FT-IR)
殼聚(jù)糖或(huò)殼(ké)聚糖鹽傅裏葉變換(huàn)紅(hóng)外(wài)光譜應符合(hé)相(xiāng)應(yīng)的特征峰，寬峰(b)數(shù)值(zhí)偏(piān)差不(bù)大於(yú)150cm^-1，其他峰數(shù)值偏(piān)差不大於(yú)20cm^-1
。殼(ké)聚糖(táng)或殼(ké)聚(jù)糖鹽典(diǎn)型的(dí)FT-IR頻(pín)率(cm^-1)如(rú)表1所示
。


含量
以幹(gān)燥品(pǐn)計算(suàn)，殼(ké)聚(jù)糖或其鹽(yán)的含量應不(bù)小於85%
。
脫乙酰度(dù)
應(yīng)為標示(shì)值(zhí)的(dí)90%~110%
。
pH
殼聚(jù)糖(táng)檢測液的(dí)pH應為5.0~8.0；殼聚糖鹽(yán)檢測液的pH應為4.0~6.0
。
動(dòng)力黏度(dù)
在20°C時殼(ké)聚糖(táng)的(dí)動(dòng)力(lì)黏(nián)度不(bù)得超過標示量(liáng)的 80%~120%
。
注(zhù): 以(yǐ)mPa·s或(huò)Pa·s為(wéi)單位標明黏度(dù)
。
重均(jūn)分子(zǐ)量(liáng)及(jí)相對(duì)分子質量分布
殼聚(jù)糖(táng)或其(qí)鹽重(zhòng)均分子量(liáng)和相對(duì)分子質量分布(Mw/Mn)由(yóu)製造(zào)商確定(dìng)
。
重金屬含量
重金屬含量(以(yǐ)Pb計(jì))應(yīng)不大(dà)於10μg/g(質量分數(shù))
。
蛋白(bái)質(zhì)含量
殼聚糖(táng)蛋(dàn)白(bái)質殘留(liú)量(liáng)應不大於(yú)0.2%(質(zhì)量分(fēn)數(shù))
。
乙醇等有(yǒu)機(jī)溶劑殘餘(yú)量(liáng)
乙醇殘(cán)餘(yú)量(liáng)應不(bù)大(dà)於0.5%(質量分數(shù))
。
注: 如在(zài)加(jiā)工過(guò)程中使用了(liǎo)除乙醇之(zhī)外(wài)的其(qí)他有機溶(róng)劑，幹燥失(shī)重應(yīng)不大於10%(質量分(fēn)數(shù))
。
熾(chì)灼(zhuó)殘渣
應(yīng)不大(dà)於1.0%(質量分數)
。
不溶物
應(yīng)不(bù)大(dà)於(yú)0.5%(質量分數)
。
砷(shēn)鹽(yán)
不(bù)得過(guò)百萬分之(zhī)一
。
細菌內(nèi) 毒(dú)素含量(liáng)
每1.0mg殼(ké)聚(jù)糖(táng)或其鹽細(xì)菌內毒素含量應小於0.05EU
。
注(zhù): 如(rú)果(guǒ)以非無菌(jūn)的方式提供(gōng)，則(zé)最終(zhōng)用戶需(xū)進行去(qù)除(chú)細菌內毒(dú)素的處理以達到細菌內毒(dú)素(sù)要求(qiú)
。
無菌試驗(yàn)
應(yīng)無菌(jūn)
。如(rú)果(guǒ)殼(ké)聚糖或其(qí)鹽(yán)以無菌(jūn)方式提供，應進行(háng)該(gāi)項目(mù)的檢測，並(bìng)按照 GB 18278.1，GB 18279.1，GB18280.1 進行無(wú)菌工藝(yì)確(què)認(rèn)
。如(rú)果采(cǎi)用(yòng)環(huán)氧乙(yǐ)烷滅(miè)菌，還應按照 GB/T 16886.7 對(duì)其(qí)殘留量(liáng)進(jìn)行控製和檢測(cè)
。
微(wēi)生(shēng)物限(xiàn)度
每(měi)克(kè)(g)供(gōng)試品(pǐn)中需氧菌(jūn)總(zǒng)數小(xiǎo)於100CFU，黴菌和酵(jiào)母菌菌落(là)數(shù)小(xiǎo)於20CFU，不得檢出金黃色葡萄球(qiú)菌，銅(tóng)綠假單(dān)胞菌(jūn)和(hé)大腸(cháng)埃希(xī)菌(jūn)
。
注(zhù): 如(rú)果殼(ké)聚(jù)糖(táng)或其鹽以(yǐ)非無菌的(dí)方式(shì)提(tí)供，則進(jìn)行該項目(mù)的(dí)檢測
。
生物學(xué)性(xìng)能
應按照(zhào) GB/T 16886.1 的(dí)要求(qiú)對殼聚糖(táng)及(jí)其鹽進(jìn)行生(shēng)物學評(píng)價
。

試驗(yàn)方法(fǎ)
脫乙(yǐ)酰度(dù)
脫(tuō)乙酰(xiān)度可(kě)采用以(yǐ)下方法測定(dìng)，但不限於以下(xià)方(fāng)法(fǎ)，應(yīng)符(fú)合"脫(tuō)乙(yǐ)酰度(dù)"規定
。
殼聚糖鹽樣品的製(zhì)備
稱(chēng)取約2g殼(ké)聚糖鹽(yán)，置燒(shāo)杯中，加乙醇100mL，邊(biān)攪(jiǎo)拌(bàn)邊滴加(jiā)10%*溶(róng)液(yè)，至pH大於8
。過(guò)濾，用(yòng)水(shuǐ)洗(xǐ)滌沉澱(diàn)物(wù)至(zhì)洗(xǐ)出(chū)液呈(chéng)中(zhōng)性(xìng)，50°C幹(gān)燥(zào)4h，再(zài)於105°C幹燥至(zhì)恒重，作為供試(shì)品(pǐn)
。

脫乙酰度測(cè)定(dìng)——酸(suān)鹼(jiǎn)滴(dī)定(dìng)法(fǎ)
準(zhǔn)確稱取在(zài)105°C下幹(gān)燥(zào)至恒(héng)重(zhòng)的樣(yàng)品(pǐn)0.2g~0.3g，置於250mL錐(zhuī)形瓶(píng)中(zhōng)，加(jiā)入0.1mol/L的鹽酸(suān)滴(dī)定(dìng)液(yè)30mL，在(zài)20°C~25°C下(xià)攪拌(bàn)至溶解(jiě)(可(kě)加(jiā)入(rù)適量水稀釋(shì))
。加(jiā)入(rù)甲(jiǎ)基(jī)橙-苯胺(àn)藍(將0.1%的甲(jiǎ)基橙水溶液和(hé)0.1%苯(běn)胺(àn)藍水溶液以1:2體(tǐ)積比混(hùn)合)指(zhǐ)示劑5滴~6滴，用(yòng)*滴(dī)定液(0.1mol/L)滴(dī)至紅色(sè)褪去
。按(àn)式(1)和(hé)式(shì)(2)計(jì)算(suàn)
。

式(shì)中(zhōng):
p  ——樣品中氨基(jī)含量(liáng)，%；
c₁ ——鹽酸滴定液的(dí)濃度，單(dān)位(wèi)為摩(mó)爾每升(mol/L)；
V₁——鹽酸滴(dī)定液(yè)的(dí)體積，單(dān)位為毫(háo)升(shēng)(mL)；
c₂ ——*滴定液(yè)的濃度，單位(wèi)為摩爾(ěr)每升(mol/L)；
V₂——*滴定(dìng)液的體積，單(dān)位(wèi)為(wéi)毫(háo)升(shēng)(mL)；
16——氨(ān)基(jī)的(dí)相對分子質量(liáng)；
m ——樣(yàng)品(pǐn)質量(liáng)，單位(wèi)為(wéi)克(kè)(g)；
D.D——樣品的脫乙(yǐ)酰度(dù)，%；
203——N-乙酰氨(ān)基(jī)-D-葡(pú)萄糖(táng)結(jié)構單(dān)元相(xiāng)對分子(zǐ)質量(liáng)；
42 ——乙酰基(jī)的(dí)相對分子(zǐ)質(zhì)量(liáng)
。

脫(tuō)乙酰度(dù)測定——雙突躍電位(wèi)滴定法(fǎ)
準確(què)稱(chēng)取在105°C下幹(gān)燥(zào)至恒重(zhòng)的樣(yàng)品(pǐn)0.2g~0.3g，加入過量的0.1mol/L鹽酸滴定(dìng)液，攪拌至溶解
。然後(hòu)在電位(wèi)滴定(dìng)裝置(zhì)上(shàng)用(yòng)*滴定液滴(dī)定(dìng)，*滴定(dìng)液(yè)首先中和過量(liáng)的(dí)HCl，pH出(chū)現急劇上升，即(jí)第(dì)一個(gè)突變(biàn)，然後*滴定(dìng)液再(zài)中(zhōng)和與(yǔ)殼聚(jù)糖的(dí)氨基(jī)結合(hé)的(dí)鹽(yán)酸，達(dá)到(dào)滴定等當(dāng)點(diǎn)時，pH出現(xiàn)第二(èr)個突(tū)變(biàn)，兩(liǎng)個突躍(yuè)點消(xiāo)耗(hào)的(dí)*摩(mó)爾數相(xiāng)當於樣(yàng)品中的氨基(jī)摩爾(ěr)數
。按式(shì)(3)計(jì)算
。

式中:
D.D——樣品的脫(tuō)乙酰(xiān)度，%；
ΔV ——兩突躍點(diǎn)之間消耗的(dí)*滴定(dìng)液體積之差，單(dān)位(wèi)為(wéi)毫(háo)升(mL)；
c_NaOH——*滴定液(yè)的(dí)濃(nóng)度，單(dān)位(wèi)為摩爾每(měi)升(shēng)(mol/L)；
m ——樣品質量，單位為克(g)；
16——氨(ān)基(jī)的(dí)相對(duì)分子質(zhì)量(liáng)；
0.0994——理論氨基含量(liáng)
。
以方(fāng)法"脫乙酰度(dù)測(cè)定(dìng)——雙突(tū)躍電位(wèi)滴定(dìng)法"為仲裁(cái)方法
。