GB/T 8622-2006 飼(sì)料用(yòng)大豆製(zhì)品中(zhōng)尿(niào)素酶活性(xìng)的(dí)測定(dìng)

範圍
本(běn)標準規定(dìng)了(liǎo)大豆(dòu)製品(pǐn)及(jí)其(qí)副產品中尿(niào)素(sù)酶(méi)活(huó)性的測(cè)定(dìng)。
本標(biāo)準(zhǔn)適用於大豆，由大豆製得的(dí)產品(pǐn)和副(fù)產品(pǐn)中尿素(sù)酶(méi)活性的測(cè)定(dìng)。此(cǐ)方法(fǎ)可了解大豆(dòu)製品的濕(shī)熱(rè)處(chǔ)理程度。

術語和(hé)定義
下列(liè)術語和l定義適用(yòng)於(yú)本標準(zhǔn)。
大豆製品中(zhōng)尿素酶(méi)活性  urease activity soya bean products
在(zài)30°C±0.5°C和(hé)pH7的情況(kuàng)下，每克大豆製品(pǐn)每分(fēn)鐘(zhōng)分(fēn)解尿素(sù)所釋放(fàng)的氨(ān)基氮(dàn)的質量。
注: 以尿素酶活性(xìng)單位每(měi)克(kè)(U/g)表示。

原(yuán)理(lǐ)
將粉(fěn)碎(suì)的(dí)大(dà)豆製(zhì)品與(yǔ)中(zhōng)性(xìng)尿素(sù)緩(huǎn)衝溶液混合，在30°C±0.5°C下(xià)精(jīng).確(què)保溫30min，尿(niào)素(sù)酶(méi)催化(huà)尿素水解產(chǎn)生氨(ān)的(dí)反應。用過(guò)量鹽酸(suān)中(zhōng)和所產生的氨(ān)，再用(yòng)*標(biāo)準溶液回滴。

儀(yí)器設(shè)備
粉碎機(jī): 粉碎時應不(bù)生強(qiáng)熱(rè)。
樣(yàng)品(pǐn)篩: 孔徑200μm。
分析天平: 感(gǎn)量(liáng): 0.1mg。
恒(héng)溫(wēn)水(shuǐ)浴: 可(kě)控溫30°C±0.5°C。
計(jì)時器。
酸度(dù)計(jì): 精度(dù)0.02，附有磁力(lì)攪(jiǎo)拌器和滴(dī)定裝(zhuāng)置(zhì)。
實驗(yàn)室(shì)常用(yòng)玻璃儀(yí)器。

試(shì)劑(jì)和溶液
試劑為(wéi)分析(xī)純，水(shuǐ)應(yīng)符合 GB/T 6682 的規定。
尿(niào)素緩(huǎn)衝溶(róng)液(yè)(pH7.0±0.1)
稱(chēng)取8.95g磷酸氫(qīng)二鈉Na₂HPO₄•12H₂O)，3.40g磷酸(suān)二氫鉀(KH₂PO₄)溶於水並(bìng)稀(xī)釋至(zhì)1000mL，再將30g尿素溶(róng)在(zài)此緩衝(chōng)液(yè)中，有(yǒu)效(xiào)期1個月。
鹽酸(suān)溶液[c(HCl)=0.1mol/L]
移(yí)取8.3mL 鹽酸，用水稀釋至1000mL。
*溶液(yè)[c(NaOH)=0.1mol/L]
稱(chēng)取4g*溶(róng)於水並稀釋(shì)至(zhì)1000mL，按 GB/T 601 規定(dìng)的(dí)方法配製和標定(dìng)。
甲基(jī)紅，溴(xiù)甲酚綠混合(hé)乙(yǐ)醇(chún)溶(róng)液
稱(chēng)取0.1g甲基紅，溶(róng)於95%乙醇並(bìng)稀釋至(zhì)100mL，再(zài)稱取(qǔ)0.5g溴(xiù)甲酚綠，溶於(yú)95%乙醇並稀釋至100mL，兩(liǎng)種溶(róng)液等(děng)體積(jī)混(hùn)合(hé)，儲(chǔ)存(cún)於棕色瓶中。

試(shì)樣的(dí)製(zhì)備
用(yòng)粉碎機將(jiāng)具(jù)有代(dài)表性的樣(yàng)品(pǐn)粉碎(suì)，使(shǐ)之全(quán)部(bù)通過樣品篩(shāi)。對特殊(shū)樣品(水分(fēn)或揮發物(wù)含(hán)量較高(gāo)而(ér)無法粉碎的樣品)應(yīng)先(xiān)在(zài)實(shí)驗室溫度(dù)下(xià)進行預幹燥，再進(jìn)行粉碎(suì)，當(dāng)計(jì)算結果時應將幹(gān)燥(zào)失(shī)重計算在(zài)內。

測定(dìng)步(bù)驟(zhòu)
稱取(qǔ)約0.2g製備好(hǎo)的試(shì)樣(yàng)，精(jīng).確至(zhì)0.1mg，於(yú)玻璃試(shì)管(guǎn)中(如(rú)活性很高(gāo)可(kě)稱0.05g試樣)，加入10mL尿素緩衝液(yè)，立(lì)即(jí)蓋好(hǎo)試(shì)管蓋劇(jù)烈(liè)振(zhèn)搖後，將試管馬上置於30°C±0.5°C恒(héng)溫水浴(yù)中，計時保持30min±10s。要求每個試樣加入(rù)尿(niào)素緩(huǎn)衝(chōng)液的時(shí)間(jiān)間(jiān)隔保(bǎo)持(chí)一致(zhì)。停(tíng)止反應時再以(yǐ)相同(tóng)的時(shí)間(jiān)間隔加入10mL鹽(yán)酸溶液，振搖後迅(xùn)速(sù)冷(lěng)卻至(zhì)20°C。將(jiāng)試(shì)管(guǎn)內容(róng)物(wù)全(quán)部(bù)轉入(rù)小燒杯中，用20mL水衝洗(xǐ)試(shì)管數次(cì)，以*標準溶(róng)液(yè)用(yòng)酸度(dù)計滴(dī)定至(zhì)pH4.70。如(rú)果選(xuǎn)擇用(yòng)指(zhǐ)示劑，則將試(shì)管(guǎn)內容物(wù)全部轉(zhuǎn)入250mL錐形瓶中加入8滴~10滴(dī)混合指示劑，以*標(biāo)準溶(róng)液滴定至溶(róng)液呈(chéng)藍綠色(sè)。
另(lìng)取試管(guǎn)作空白(bái)試(shì)驗(yàn)。稱取約0.2g 製備好(hǎo)的(dí)試(shì)樣精(jīng).確至0.1mg，於玻(bō)璃(lí)試管中(zhōng)(如活性很高(gāo)可(kě)稱0.05g試樣(yàng))，加入10mL鹽(yán)酸(suān)溶液(yè)，振搖(yáo)後再加入10mL尿素緩衝液(yè)，立即(jí)蓋好試管蓋(gài)劇烈振搖，將試管馬(mǎ)上置於30°C±0.5°C恒(héng)溫(wēn)水浴中，計時(shí)保(bǎo)持(chí)30min±10s。停止(zhǐ)反(fǎn)應時將(jiāng)試管(guǎn)迅(xùn)速冷(lěng)卻(què)至20°C。將試(shì)管內容物全(quán)部(bù)轉(zhuǎn)入(rù)小燒杯中，用(yòng)20mL水(shuǐ)衝洗試(shì)管(guǎn)數(shù)次，以*標準(zhǔn)溶液用酸度計(jì)滴(dī)定至pH4.70。如(rú)果選擇用(yòng)指(zhǐ)示(shì)劑(jì)，則將(jiāng)成(chéng)管內容物全部轉入250mL錐形(xíng)瓶(píng)中加(jiā)入8滴~10滴(dī)混合(hé)指示(shì)劑(jì)，以*標(biāo)準溶(róng)液(yè)滴(dī)定至溶液呈(chéng)藍綠色(sè)。

結果計算
大(dà)豆製品(pǐn)中(zhōng)尿(niào)素(sù)酶活(huó)性X，以尿(niào)素(sù)酶活性單位(wèi)每(měi)克(U/g)表(biǎo)示，按式(1)計算(suàn)。若(ruò)試(shì)樣經(jīng)粉碎前的預幹(gān)燥處(chǔ)理(lǐ)後，則(zé)按式(2)計算(suàn):

式中(zhōng):
X 一一試(shì)樣的尿(niào)素酶活性(xìng)，單位為活(huó)性單位每克(U/g)；
c  一(yī)一*標(biāo)準滴(dī)定溶(róng)液濃度，單(dān)位(wèi)為(wéi)摩爾每(měi)升(mol/L)；
V₀一一空白(bái)消(xiāo)耗(hào)*標準滴(dī)定溶液體積，單(dān)位(wèi)為(wéi)毫升(mL)；
V  一(yī)一(yī)試樣消(xiāo)耗*標(biāo)準滴定(dìng)溶(róng)液(yè)體積，單(dān)位(wèi)為(wéi)毫升(shēng)(mL)；
14一(yī)一(yī)氮(dàn)的(dí)摩(mó)爾質(zhì)量，M(N₂)=14g/mol；
30一(yī)一反(fǎn)應(yīng)時間(jiān)，單(dān)位為分鐘(min)；
m 一(yī)一試(shì)樣質量(liáng)，單(dān)位為克(kè)(g)；
S  一一預幹燥時出(chū)樣(yàng)失(shī)重(zhòng)的質量分(fēn)數，%。
計算(suàn)結果表(biǎo)示(shì)到(dào)小(xiǎo)數點後兩位。
重復性(xìng): 同(tóng)一(yī)分(fēn)析人(rén)員(yuán)用相同分析方法，同時或連續(xù)兩(liǎng)次(cì)測(cè)定(dìng)活性(xìng)≤0.2時結果之差不(bù)超過(guò)平(píng)均值(zhí)的20%，活(huó)性>0.2時(shí)結(jié)果之(zhī)差不(bù)超過平(píng)均值的10%，結果以算術(shù)平均值表示。